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离心机的重要性从实验中体现

发布时间:2021-8-13 12:1:46??????点击:

  离心机可以让你实现一种简易快速提取细菌(含革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌)和酵母染色体DNA的方法。

  实验中,效率是关键,比如快速获取微生物基因组DNA在基因克隆、重组子的筛选以及分类学中十分必需。

  接下来先容一种采用本法所提染色体DNA,可直接应用于常规的分子生物学实验,包括PCR、限制性内切酶的切割,以及基因组文库的构建。其中,有个关键性实验设备——离心机,少了它可不行。

  1、 取1ml过夜培养菌液于8000g,离心机离心2min。去除培养基后,用400ul STE缓冲液(100mM NaCl,10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)重悬菌体,按相同条件离心清洗菌体两次。

  2、 收集的菌体用200ul TE缓冲液(10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)悬起后加约50mg 直径425-600um 规格的玻璃珠,再加入100ul Tirs饱和苯酚。

  3、 上述混合液在漩涡振荡器上振荡(细菌,振荡60s;酵母,振荡120s-200s),随后于4℃,13000g,离心5min。

  4、 汲取上层水相(约160ul)转移至一个新的离心管中,加TE缓冲液补至200ul,再加入100ul氯仿混匀后,于4℃,13000g,离心5min。重复此步两到三次。

  5、 转移上层水相(约160ul)至一个新的离心管中,补加40ul TE和5ul RNase(10mg/ml),37℃消化10min。

  6、 加入100ul 氯仿混匀于4℃,13000g,离心机离心5min。

  7、 转移上层水相(约150ul)至一个新的离心管中。

  8、 至此,上层水相即含有纯化好的基因组DNA,可直接用于随后的常规分子生物学实验。

  以上就是简单的实验讲解,如果您想多多交流,可以前来我司参观,我司生产供应多种离心机,还能提供定制。


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